样本获取

从结肠癌患者手术切除的肿瘤组织或活检样本中获取新鲜的结直肠癌组织。

组织处理

将获取的组织在无菌条件下进行处理，去除坏死组织和血液，再用酶如胶原酶、胰蛋白酶等消化组织，将其分解成单细胞或小细胞团。

细胞筛选与培养

通过细胞滤网过滤消化后的细胞悬液，去除大的组织碎片，然后将筛选后的细胞接种在含有特定培养基的培养板或培养皿中。培养基通常包含生长因子、细胞因子、基质成分等，如 Advanced DMEM/F12 基础培养基添加 N-acetylcysteine、N2 添加剂、B27 添加剂、GlutaMAX、HEPES、青霉素和链霉素等。

培养条件

培养环境一般需要保持合适的温度（如 37°C）、二氧化碳浓度（如 5%）和湿度。同时，要定期更换培养基，以提供充足的营养和维持合适的细胞生长环境。

类器官形成与传代

在适宜的培养条件下，细胞逐渐形成类器官结构。当类器官生长到一定程度，可以进行传代培养，以维持类器官的生长和扩增。

鉴定与检测

通过形态学观察、免疫组化、基因检测等方法对培养的类器官进行鉴定，确认其与结直肠癌的特征相符。